【检测原理】三聚氰胺(Melamine)是一种重要的氮有机化工原料，长期或反复大量摄入可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。目前三聚氰胺检测方法包括：气相色谱质谱法（GC - MS），液相色谱串联质谱法（LC - MS -MS），液相色谱法等。但操作复杂、成本较高。

实创生科的三聚氰胺酶联免疫试剂盒使用最新生物技术开发，具有方便、快速、灵敏等特点。

三聚氰胺酶联免疫试剂盒利用三聚氰胺抗体与三聚氰胺可产生特异性结合的性质，先在酶标板上预包被抗原，再加入标准品（样本）和三聚氰胺抗体，样本或标准品中的三聚氰胺与固定在酶标板上的抗原竞争三聚氰胺抗体，最后加入底物催化显色。此时显色深度与标准品（样本）中三聚氰胺的含量成反比。

【使用方法】

准备：将要使用的酶标板条插入酶标板架上， 并记录各标准品和样品的位置，为减小检测值波动建议做双孔平行实验（每个样本/标准品点两孔），未使用的酶标板条用自封袋密封后，保存于 2-8℃环境中以防变质。

加样：向对应微孔中加入标准品工作液/样品溶液 50μL，再向每孔中加入 50μL 酶标抗体工作液。

孵育：轻轻振荡酶标板 10s，使孔内液体充分混匀后，盖好盖板膜于 25℃避光反应 30 分钟。

洗涤：取出酶标板后小心揭开盖板膜，倒出 板孔中液体后，在每孔加 250μL 洗涤工作液， 浸泡 15-30s 后倒掉洗涤工作液，然后再加入洗涤工作液重复洗涤 3-4 次后，将酶标板倒置于吸水纸上，用力拍干；

显色：在每孔中加入 100μL 底物 A 和底物 B 的混合液（注：底物 A 液、底物 B 液必须按体积 1:1 充分混合，混合液在 10 分钟内使用， 切不可使用金属容器盛装、搅拌试剂以免底物变质失效）。

孵育：轻轻振荡酶标板 10 s，使孔内液体充分混匀后，盖好盖板膜于 25℃避光反应 15 分钟。

终止：在反应后的微孔中加入终止液 50μL/ 孔，底物液由蓝变黄表明终止成功。

读数：终止后的酶标板应在 5 分钟内用酶标仪读数，建议使用 450nm、630nm 双波长读取酶标板吸光度值。

【判定结果】

设各标准品（或样品）的吸光度平均值为 B， 零标准（浓度为 0ppb 的标准品）吸光度平均值B0 以(B/B0)×100 为各标准品（或样品）对应的吸光度的百分比。

使用半对数系统代入标准品对应的吸光度的百分比，与标准品浓度拟合出标准曲线。

将待检样品吸光度的百分比代入拟合出的标准曲线方程中，即可得出样品对应的浓度，最后乘以样品相应的稀释倍数，即可得出样品中检测物含量。

本试剂盒为定量或半定量试剂盒，建议用于大量样本筛查分析。若检测结果为阳性，建议使用仪器方法开展确证实验（如 GC/MS、LC-MS/MS 等）

【注意事项】

1、使用试剂盒前，请务必仔细阅读说明书。 试剂盒使用前，需将盒内各组份置于实验台上回温至室温（25±2℃）（提示：约 1 h）。

2、试剂使用前需摇匀，混合时应避免出现气泡。 枪头为一次性用品，为防止试剂交叉污染，检测过程中所用枪头不得重复使用。

3、请勿使用过期试剂盒，不同批号试剂盒中的试剂不得混用。

4、样品处理完毕后请立即分析，否则可能影响检测结果。

5、底物 A 液、底物 B 液均为无色透明液体，若在使用前已变成蓝色，或混合后立即变蓝，说明 试剂已污染或变质。

6、加样过程在保证精度的前提下一定要迅速， 以免反应时间差对检测结果产生影响。

7、终止液中含有硫酸，若不小心溅上皮肤或衣物请立即用大量清水冲洗。若不慎入眼，请在彻 底清洗后去医院检查。