【检测原理】氟苯尼考又称氟甲砜霉素（Florfenicol, FF），是甲砜霉素（TAP）的衍生物。属于广谱抗菌药物，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌及支原体等作用明显，被广泛应用于畜禽、水产养殖业及养蜂业。氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留在食品中易导致潜在再生障碍性贫血。因此联合国食品法典委员会（CAC）和许多国家规定食品中氟苯尼考（FF）的残留量不得超过0.1ppm，日本限量检出限为0.1ppm，我国限量检出限为1ppm。

实创生科的氟苯尼考酶联免疫试剂盒使用最新生物技术开发，具有方便、快速、灵敏等特点。

氟苯尼考酶联免疫试剂盒利用氟苯尼考抗体与氟苯尼考可产生特异性结合的性质，先在酶标板上预包被抗原，再加入标准品（样本）和氟苯尼考抗体，氟苯尼考药物与固定在酶标板上的抗原竞争氟苯尼考抗体，最后加入底物催化显色。此时显色深度与标准品（样本）中氟苯尼考药物的含量成反比。

【使用方法】

准备：将要使用的酶标板条插入酶标板架上，并记录各标准品和样品的位置，为减小检测值波动建议做双孔平行实验（每个样本/标准品点两孔），未使用的酶标板条用自封袋密封后，保存于2-8℃环境中以防变质。

加样：向对应微孔中加入标准品工作液/样品溶液50μL，再向每孔中加入50μL酶标记物工作液。

孵育：轻轻振荡酶标板10s，使孔内液体充分混匀后，盖好盖板膜于25℃避光反应30 min。

洗涤：取出酶标板后小心揭开盖板膜，倒出板孔中液体后，在每孔加 250μL洗涤工作液，浸泡15-30s后倒掉洗涤工作液，然后再加入洗涤工作液重复洗涤3-4次后，将酶标板倒置于吸水纸上，用力拍干。

显色：在每孔中加入100μL 底物A和底物B的混合液（注：底物A液、底物B液必须按体积1:1充分混合，混合液在10 min内使用，切不可使用金属容器盛装、搅拌试剂以免底物变质失效）。

孵育：轻轻振荡酶标板15s，使孔内液体充分混匀后，盖好盖板膜于25℃避光反应15-20 min。

终止：在反应后的微孔中加入终止液50μL/孔，底物液由蓝变黄表明终止成功。

读数：终止后的酶标板应在5min内用酶标仪读数，建议使用450nm、630nm双波长读取酶标板吸光度值。

【判定结果】

设各标准品（或样品）的吸光度平均值为B，零标准（浓度为0ppb的标准品）吸光度平均值B0以(B/B0)×100%为各标准品（或样品）对应的吸光度的百分比。

使用半对数系统代入标准品对应的吸光度的百分比，与标准品浓度拟合出标准曲线。

将待检样品吸光度的百分比代入拟合出的标准曲线方程中，即可得出样品对应的浓度，最 后乘以样品相应的稀释倍数，即可得出样品中检测物含量。

本试剂盒为定量或半定量试剂盒，建议用于大量样本筛查分析。若检测结果为阳性，建议使用仪器方法开展确证实验（如GC/MS、LC-MS/MS等）

【注意事项】

1、使用试剂盒前，请务必仔细阅读说明书。

2、试剂盒使用前，需将盒内各组份置于实验台上回温至室温（25±2℃）（提示：约1 h）。

3、试剂使用前需摇匀，混合时应避免出现气泡。

4、枪头为一次性用品，为防止试剂交叉污染，检测过程中所用枪头不得重复使用。

5、请勿使用过期试剂盒，不同批号试剂盒中的试剂不得混用。

6、样品处理完毕后请立即分析，否则可能影响检测结果。

7、底物A液、底物B液均为无色透明液体，若在使用前已变成蓝色，或混合后立即变蓝，说明试剂已污染或变质。

8、加样过程在保证精度的前提下一定要迅速，以免反应时间差对检测结果产生影响。

9、终止液中含有硫酸，若不小心溅上皮肤或衣物请立即用大量清水冲洗。若不慎入眼，请在彻底清洗后去医院检查。